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磷酸三鈣(下稱TCP)的新方法。由于商品磷酸三鈣在干燥時有附聚的傾向,而且在加入粉狀制品(如干飲料制品)時由于食品酸(如檸檬酸)的存在而溶解遲緩且不完全,在飲料時產生混濁和沉淀,所以不能令人滿意。
磷酸鈣(一、二、三鈣和羥基磷灰石)在日常生活中具有廣泛的用途。相當不易溶于水的TCP和羥基磷灰石在動物界中是骨骼和牙齒的主要礦物成分。磷酸鈣在水中的溶解度隨著磷酸的中和程度的增加而降低(例如,磷酸-鈣在水中的溶解度,而羥基磷灰石在水中的溶解度)。所有的磷酸鈣鹽都溶于強酸(如鹽酸);但是對于相對弱的食品酸(如檸檬酸),磷酸鈣鹽的溶解速度和溶解程度則主要取決于它們的中和程度。堿性很強的磷酸鹽-羥基磷灰石鈣在檸檬酸中溶解得極慢,所以要使飲料保持無沉淀或不混濁是不可能的。


提高磷酸鈣轉染法效率的共通步驟,目的都是為了避免產生會被細胞內吞、加工失效的大顆粒沉淀。
提高轉染效率的操作有以下這些:
1、將小分子DNA整合在高分子質量基因組DNA上,以大分子作為運載體,能提高轉染效率。
2、測試緩沖液適合的ph,可制備幾批pH范圍為6.90~7.15的HEPES鹽緩沖液,分別測試緩沖效率,找到適pH值。
3、使用轉染促進劑,如甘油、氯喹、其他可購買的轉染促進劑。因為這些試劑對細胞有一定毒性,因此,應針對每種細胞系通過實驗確定轉染促進劑處理的佳時機、時長和強度。
除了這些共通的步驟,不同廠家還會對混勻DNA和磷酸鈣的速度有要求。有些方法要求只能輕輕攪動,有些建議用移液器溫和吹吸混勻,有些則提倡應緩慢混合。
因此,在使用磷酸鈣轉染時,應針對不同試劑和細胞系,耐心調整實驗參數,才是獲得高轉染效率的關鍵。



馮山霞女士
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